海绵来源真菌Aspergillus flavus 次级代谢产物研究

摘 要：目的 对海绵来源真菌Aspergillus flavus次级代谢产物进行化学结构研究。方法 利用薄层色谱、硅胶柱层析、高效液相色谱和中压制备液相色谱等分离方法对真菌Aspergillus flavus 次级代谢产物进行分离、纯化;运用核磁共振、质谱等现代波谱学方法,通过与已报道数据进行对比,对化合物的化学结构进行鉴定。结果 从海绵来源真菌Aspergillus flavus 次级代谢产物中分离鉴定9个化合物,包括2个已知二酮哌嗪生物碱 Ditryptophenaline (1)、3-[(1H-Indol-3-yi)methyl]-6-benzylpiperazine- -2,5-dione (2),7个已知化合物 9,12-octadecadienoic acid methyl ester (3)、4-Hydroxy-3-methoxypropiophenone (4)、 Arboreumine (5)、 Asperfuran (6)、 p-Hydroxybenzoic acid (7)、 polybotrin (8)和Kojic acid dimethyl ether (9)。结论 从真菌Aspeigillus flavus 中分离得到9个化合物。     

抗凝血活性海洋硫酸多糖HP1-1的结构研究

目的 对抗凝血活性海洋硫酸多糖HP1-1的结构进行研究。方法 通过高效液相色谱(HPLC)、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、傅里叶变换红外光谱(IR)以及气质联用色谱(GC-MS)和核磁共振波谱(NMR)方法,对抗凝血活性海洋硫酸多糖HP1-1的结构进行解析。结果 海洋硫酸多糖HP1-1的分子量为297 kDa,总糖和硫酸基含量分别为78.1%和12.3%;HP1-1主要由葡萄糖组成,含有少量半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖;HP1-1糖链中含有→4)-Glcp-(1→、→3)-Glcp-(1→、→3,4)-Glcp-(1→、→4)-Arap-(1→、→3,4)-Galp-(1→和→3)-Galp-(1→,硫酸基位于→4)-Glcp-(1→的C-3位和→3)-Galp-(1→的C-4位。 结论 海洋多糖HP1-1是主要由葡萄糖组成的硫酸多糖,含有多种糖基连接方式,为独特结构序列的新颖海洋硫酸甘露阿拉伯半乳葡聚糖。     

ETP类化合物靶向Hsp90-C端抗肿瘤作用以及对其客户蛋白选择性的影响

目的探究海洋来源新型多硫代二酮哌嗪(ETP)类化合物PEN-A在体内外的抗肿瘤活性并进一步明确PEN-A靶向HSP90的作用特点;比较并阐明3种ETP类化合物PEN-A,PNSA和HDN-1对于HSP90客户蛋白选择性抑制作用的机制。方法 MTT法、细胞划痕实验检测PEN-A对于肿瘤细胞系增殖、迁移的抑制作用;Co-IP检测PEN-A对于HSP90与其客户蛋白结合的影响;荧光偏振、胰酶水解指纹图谱、表面等离子共振(SPR)实验检测PEN-A与HSP90蛋白的结合位点;体内评价PEN-A对于结肠癌移植瘤的抗肿瘤活性。HSP90 ATPase实验、ADH聚合实验检测三种ETP类化合物对于HSP90活性的影响;F5M实验、胰酶水解指纹图谱检测3种化合物与HSP90的结合位点。结果 PEN-A对于多种肿瘤细胞均有增殖抑制作用,且显著抑制HCT-116细胞的增殖、迁移能力;PEN-A靶向结合于HSP90C端从而抑制其与客户蛋白的结合,PEN-A在体内具有靶向抑制HSP90的抗肿瘤活性。3种ETP类化合物PEN-A,PNSA和HDN-1均可抑制HSP90的ATPase活性及C端蛋白的聚合,但由于三者结合位点的不同导致对于HSP90客户蛋白的降解具有选择性。结论研究了PEN-A靶向Hsp90-C端抑制肿瘤的作用特点,为今后将其开发为一种新的靶向Hsp90-C端的抗肿瘤药物奠定基础。明确了三种ETP类化合物由于靶向HSP90-C端的结合位点的不同导致其对于HSP90客户蛋白抑制具有选择性,为今后寻找特异性HSP90抑制剂提供理论依据。     

1种绿藻硫酸多糖的化学组成及其结构研究

目的 对1种绿藻硫酸多糖的化学组成及其结构特征进行研究。方法 通过热水提取法,从1种石莼属海藻中提取硫酸多糖,采用强阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱对多糖进行分离纯化;采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、高效液相色谱以及化学方法对多糖的纯度、分子量、单糖组成和化学成分进行分析测定;通过红外光谱和气质联用方法对多糖的结构进行表征。结果 多糖HP2S在HPGPC色谱图上呈单一对称峰,分子量为90.5 kDa,硫酸根和糖醛酸含量分别为32.1%和7.4%,HP2S主要由鼠李糖组成,含有少量葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖和木糖,HP2S糖链中鼠李糖主要存在形式为(1→2)-Rhap 、(1→3)-Rhap 和(1→2, 3)-Rhap,硫酸根位于(1→3)-Rhap 的C-2位或(1→2)-Rhap 的C-3位上。结论 水溶性多糖HP2S是1种结构新颖的主要由鼠李糖组成的硫酸化多糖。     

红树植物拟海桑(Sonneratia paracaseolaris)化学成分研究

目的研究红树植物拟海桑Sonneratia paracaseolaris的化学成分。方法利用硅胶柱层析、凝胶Sephadex LH-20柱层析、HPLC等手段对化学成分进行了分离纯化;通过理化性质,结合波谱数据分析并与文献对照,鉴定化合物的结构,分别以MTT和SRB法评价化合物的抗肿瘤活性。结果从红树植物拟海桑Sonneratia paracaseolaris的甲醇提取物中,分离鉴定了9个单体化合物:9-氧橙花叔酮(1),3,7,11-三甲基-1,7(E),10-十二碳三烯-3-羟基-9-酮(2),(22E,24R)-5α,8α-过氧化麦角甾-23-甲基-6,22-二烯-3β-醇(3),(22...     

海洋芽孢杆菌B-9987中macrolactin生物合成基因簇分析及反式酰基转移酶高表达

目的 对海洋芽孢杆菌B-9987中macrolactin生物合成基因簇及其关键基因进行分析、鉴定及功能研究。方法 通过生物信息学手段对基因簇的基因组成和功能结构域进行了分析;构建了用于酰基转移酶基因高表达的大肠杆菌—芽孢杆菌穿梭载体,采用电击转化方法导入B-9987之中进行高表达。 结果 macrolactins是由位于同一个操纵子的8个基因bmmA-I所编码的反式酰基转移酶聚酮合酶体系组装而成,反式酰基转移酶(trans-acyltransferase,trans-AT)BmmA的高表达使macrolactin A的产量提高了约0.6倍。结论 macrolactin生物合成基因簇在具有生物防治活性的芽孢杆菌中普遍存在,且高度保守;反式酰基转移酶的高表达能够增加macrolactin A的产量。     

离子色谱法测定藻酸双酯钠中游离和结合硫酸根含量

目的建立1种快速、简便、灵敏的离子色谱法测定藻酸双酯钠中游离和结合硫酸根的方法。方法采用氧瓶燃烧法对样品进行有机破坏,将有机硫转化为无机硫酸根,采用离子色谱法测定样品总硫酸根含量;又将样品直接溶解后测定游离硫酸根含量,间接计算样品中结合硫酸根含量。结果硫酸根在0.6~20μg/mL浓度范围内线性关系良好(r2=0.9991),样品重复性RSD     

南极海洋真菌Penicillium chrysogenum PR4-1-3的活性次级代谢产物研究

目的对一株具有明显细胞毒活性的南极海洋真菌Penicillium chrysogenum PR4-1-3的活性成分进行研究。方法采用溶剂萃取、柱色谱层析及制备HPLC等方法对菌株发酵产物进行活性追踪分离,通过理化性质及波谱学手段进行化学结构鉴定,以SRB法评价化合物的抗肿瘤活性,采用CPE方法对化合物1和2进行抗H1N1甲型流感病毒活性测试。结果从中分离得到5个芳香酚醌类化合物,其结构分别鉴定为secalonic acid D(1)s、ecalonic acid F(2)、chrysophanol(3)、emodin(4)和citreorosein(5)。这几个化合物均具有不同程度的细胞毒活性。化合物1在50μg.mL-1时,对H1N1病毒的抑制率为50%,具有一定的抗病毒活性。结论以上化合物均为首次从南极海洋微生物中分离得到,并初步发现secalonic acid D具有一定的抗H1N1病毒活性。     

中国南海蜂海绵Haliclona cymae formis的化学成分研究

目的研究中国南海蜂海绵属Haliclona cymaeformis的化学成分。方法运用正相硅胶、反相硅胶(ODS)和凝胶(Sephadex LH-20)等多种柱色谱手段对化合物进行分离纯化;通过理化性质和波谱数据,结合文献对照,鉴定化合物的结构。结果从海绵H.cymaeformis的乙醇提取物中共分离鉴定了11个单体化合物:24-亚甲基胆甾醇(1),5α,8β-epidioxy-cholesta-6-en-3-ol(2),cholesta-7-en-3β,5α,6β,9α-tetraol(3),胆甾醇(4),3-吲哚甲酸(5),尿嘧啶(6),胸腺嘧啶(7),尿嘧啶核苷(8),胸腺嘧啶核苷(9),尿嘧啶脱氧核苷(10)和胸腺嘧啶脱氧核苷(11)。结论化合物1~11均为首次从该海绵中分离得到。细胞毒活性测试结果表明,化合物3对慢性髓原白血病细胞(K562)和人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖显示了较强的生长抑制活性。     

中药研发策略及思路

中医药是中华民族文明与智慧的结晶,必须继承和发展好。中药研发挑战与机遇并存,新思路、新技术、新方法不断涌现,推动了中医药更好的发展,本文综述了近年来中药研发主要策略及关注点,为中药深入研究提供参考。